Naslov (srp)

Молекуларна, паразитолошка и клиничка испитивања ефекта терапије паса природно инфицираних нематодом Dirofilaria immitis : докторска дисертација

Autor

Rajković, Milan, 1992-

Doprinosi

Trailović, Saša, 1963-
Bogunović, Danica, 1985-
Davitkov, Darko, 1987-
Stanimirović, Zoran, 1962-
Debeljak, Zoran, 1961-
Ilić, Tamara, 1971-
Glavinić, Uroš, 1988-

Opis (srp)

У овој докторској дисертацији извршена су молекуларна, паразитолошка и клиничка испитивања ефекта примењене терапије код паса природно инфицираних нематодом Dirofilaria immitis. У терапији паса је коришћен „slow kill― протокол који подразумева пролонгирану примену ивермектина и доксициклина. Утицај паразита на домаћина и процена ефикасности примењене терапије, праћени су испитивањем присуства и броја микрофиларија у крви применом класичних паразитолошких и молекуларних метода (PCR и qPCR); анализом концентрација хематолошких и биохемијских параметара и биомаркера NT-proBNP и D-dimer; и анализом параметара оскидативног стреса и степена оштећења ДНК.У испитивање су укључена 34 пса, која су била позитивна на тестирању „брзим― имунохроматографским тестом којим се детектује присуство антигена утеруса женке D. immitis. На основу тежине клиничке слике пси су разврстани у три групе: (а) пси без испољених симптома болести – Г1; (б) пси са испољеном средњом клиничком сликом – Г2 и (в) пси са тешком клиничком сликом – Г3. Клинички преглед и прикупљање узорака вршени су у три момента: пре почетка терапије – на презентацији (Д0); на средини терапије (90. дана – Д90) и на крају терапије (180. дана – Д180).Присуство и количина ларвених облика D. immitis (микрофиларија) у крви паса доказивано је применом модификованог Нотовог теста, а ДНК применом PCR и qPCR и умножавањем региона 16S rRNA и фрагмента cox1 гена специфичних за D. immitis, редом. Основни хематолошки и биохемијски параметри анализирани су на аутоматским анализаторима. Концентрације NT-proBNP и D-dimer анализиране су на флуоресцентном имуноесеј анализатору коришћењем уређајa за тестирање. Одређивање активности антиоксидативних ензима супероксид дисмутазе, каталазе и глутатион С-трансферазе, као и концентрације малондиалдехида обављено је спектрофотометријски. Степен оштећења ДНК домаћина, као и отпорност леукоцита на спољашње мутагене процењивани су применом базног комет теста.Старост јединки је статистички значајно утицала на тежину клиничке слике, док телесна маса паса није имала утицај на тежину клиничке слике код паса. Резултати добијени применом модификованог Нотовог теста и молекуларних метода показали су да је терапија смањила број позитивних паса на циркулишуће микрофиларије, али и стваран број микрофиларија у крви током времена. Број циркулишућих микрофиларија у све три гурпе био је статистички значајно већи пре терапије (Д0) у односу на средину (Д90) и крај терапије (Д180) када микрофиларије нису детектоване (p < 0,001), ни паразитолошким, нити молекуларним методама. Молекуларне методе показале су вишу осетљивост од модификованог Нотовог теста имајући у виду да код шест паса (17,65%) пре терапије нису установљене микрофиларије у циркулацији применом ове метода, док су помоћу молекуларних метода и код ових јединки установљене микрофиларије у циркулацији.Код испитиваних паса установљене су промене основних хематолошких параметара који су се вратили у опсеге референтних интервала на крају терапије (Д180). Најзначајније промене су уочене у активностима ензима AST, ALT и LDH, које су биле су више од горње границе референтног интервала пре почетка терапије паса. До смањења активности ензима AST и ALT дошло је већ на средини терпије, док је активност LDH остала повишена, што се задржало и на крају терапије (Д180). Код осталих биохемијских параметара установљене су или незнатне промене активности или није било детектованих промена.Коришћењем флуоресцентног имуноесеј анализатора праћена је концентрација биомаркера NT-proBNP као један од параметара оштећења срчаног мишића...

Opis (srp)

Ветеринарска медицина - Паразитологија, Ветеринарска генетика / Veterinary medicine- Parasitology, Veterinary genetics Datum odbrane: 30.05.2025.

Opis (eng)

In this doctoral dissertation, molecular, parasitological, and clinical investigations were conducted to assess the effect of applied therapy in dogs naturally infected with the nematode Dirofilaria immitis. The "slow kill" protocol, which involves prolonged administration of ivermectin and doxycycline, was used for the therapy. The impact of the parasite on the host and the evaluation of the therapy's effectiveness were monitored by testing for the presence and number of microfilariae in the blood using classical parasitological and molecular methods (PCR and qPCR), analyzing concentrations of hematological and biochemical parameters, biomarkers NT-proBNP and D-dimer, and evaluating oxidative stress parameters and DNA damage levels.A total of 34 dogs that tested positive using a "rapid" immunochromatographic test detecting the presence of D. immitis female uterine antigens were included in the study. Based on the severity of the clinical signs, the dogs were classified into three groups: (a) asymptomatic dogs – Group 1 (G1), (b) dogs with mild clinical signs – Group 2 (G2), and (c) dogs with severe clinical signs – Group 3 (G3). Clinical examination and sample collection were performed at three time points: before therapy (Day 0 – D0), at the mid-point of therapy (Day 90 – D90), and at the end of therapy (Day 180 – D180).The presence and quantity of larval forms of D. immitis (microfilariae) in the blood of the dogs were tested using a modified Knott's test, while DNA was assessed using PCR and qPCR by amplifying the 16S rRNA region and the cox1 gene fragment specific to D. immitis. Hematological and biochemical parameters were analyzed using automatic analyzers. NT-proBNP and D-dimer concentrations were analyzed using a fluorescent immunoassay analyzer. The activity of antioxidant enzymes (superoxide dismutase, catalase, and glutathione S-transferase) and the concentration of malondialdehyde were determined spectrophotometrically. DNA damage and the resistance of leukocytes to external mutagens were evaluated using the basic comet assay.The age of the dogs significantly influenced the severity of the clinical signs, while their body weight had no impact on the clinical severity. The results from the modified Knott's test and molecular methods showed that therapy reduced the number of dogs positive for circulating microfilariae, as well as the actual number of microfilariae in the blood over time. The number of circulating microfilariae in all three groups was significantly higher before therapy (D0) compared to the mid-point (D90) and the end of therapy (D180), when microfilariae were not detected by either parasitological or molecular methods (p < 0.001). Molecular methods showed higher sensitivity than the modified Knott's test, as microfilariae were not detected in circulation by the Knott's method in six dogs (17.65%) before therapy, while molecular methods still detected them in circulation in these individuals.Changes in basic hematological parameters were observed in the studied dogs, and these parameters returned to reference interval values by the end of therapy (D180). The most significant changes were noted in the activities of AST, ALT, and LDH enzymes, which were elevated above the upper reference limit before therapy. A reduction in AST and ALT activity was observed by the mid-point of therapy, while LDH activity remained elevated, which persisted until the end of therapy (D180). For other biochemical parameters, either minimal changes in activity were noted or no changes were detected.NT-proBNP concentration was monitored using the fluorescent immunoassay analyzer as a parameter of cardiac muscle damage. The values were higher in dogs with more severe clinical signs...

Jezik

srpski

Datum

2025

Licenca

Ovo delo je licencirano pod uslovima licence
Creative Commons CC BY-NC-ND 3.0 AT - Creative Commons Autorstvo - Nekomercijalno - Bez prerada 3.0 Austria License.

http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/at/legalcode

Predmet

OSNO - Opšta sistematizacija naučnih oblasti, Veterinarska patologija. Bolesti domaćih životinja

biomarkers, D-dimer, Dirofilaria immitis, comet assay, molecular diagnostics, NT-proBNP, oxidative stress, parasitological diagnostics

OSNO - Opšta sistematizacija naučnih oblasti, Veterinarska patologija. Bolesti domaćih životinja

биомаркери; D-dimer; Dirofilaria immitis; комет тест; молекуларна дијагноситка; NT-proBNP; оксидативни стрес; паразитолошка дијагностика

636.7.09:615.2(043.3)